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2016
7.18

紫外分光光度法测定蛋白质含量

紫外分光光度法测定蛋白质含量一、实验原理由于蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（OD280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。利用紫外吸收法测定蛋白质含量的优点是民迅速、简便、不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此，在蛋白质和酶的生化制备中（特别是在柱层析分离中）得到广泛应用。此法的缺点是：（1）对于测定那些与标准蛋白质酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的...
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2016
7.18

考马斯亮蓝染色测定蛋白质含量

考马斯亮蓝染色测定蛋白质含量一、实验原理考马斯亮蓝（CoomassieBrilliantBlue）测定蛋白含量存在着两种不同颜色形式，红色和蓝色。此染料与蛋白质结合后颜色由红色形式转变蓝色形式，zui大光吸收由465nm变成595nm。在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律（Beer’slaw），因此可以通过测定染料在595nm处吸收的增加量得到与其结合的蛋白质量。本法测定范围为10~100µg蛋白质。由于该法简单、迅速、干扰物质少、重复性好、灵敏度...
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2016
7.14

碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定

碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定一、实验原理碱性磷酸酶（alkalinephosphataseEC3.1.3.1简称为ALPase）广泛存于微生物界和动物界。ALPase能催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，产生无机磷酸和相应的醇、酚或糖。它也可以催化磷酸基团的转移反应，磷酸基团从磷酸酯转移到醇、酚或糖等磷酸受体上。在磷的生物和化学循环过程中，ALPase起了及其重要的作用。在生物体内ALPase与磷的代谢直接相关，参与磷与钙物质的消化、吸收、分泌以及骨骼的形成等生理生化过程...
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2016
7.14

酶的定义、特性及碱性磷酸酶于人体的意义

酶的定义、特性及碱性磷酸酶于人体的意义一、酶的定义：酶（enzyme）是具有催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体.是生物催化剂,能通过降低反应的活化能加快反应速度,但不改变反应的平衡点.绝大多数酶的化学本质是蛋白质.二、酶的特性：1.性：酶的催化效率比无机催化剂更高,使得反应速率更快；2.专一性：一种酶只能催化一种或一类底物,如蛋白酶只能催化蛋白质水解成多肽；3.多样性：酶的种类很多,大约有4000多种；4.温和性：是指酶所催化的化学反应一般是在较温和的条件下进行的；5...
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2016
7.13

Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量

Folin-酚试剂法（Lowry法）测定蛋白质含量一、实验原理蛋白质含有两个以上的肽键（—CO—NH）,因此有双缩脲反应，在碱性溶液中，能与CU2+形成络合物。Folin-酚试剂反应是在双缩脲反应的基础上，引进Folin试剂（磷钼酸-钨酸试剂）,蛋白质-铜络合物能还原磷钼酸-磷钨酸试剂，生成蓝色物质。在一定条件下，蓝色强度与蛋白质的量成正比例。本法的优点是操作简便、灵敏度高、较此外吸收法灵敏10~20倍，较双缩脲法灵敏100倍，反应约在15min内有zui大显色，并至少可稳定...
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2016
7.13

Hanus法测定不饱和脂肪酸的碘价

Hanus法测定不饱和脂肪酸的碘价一、实验原理在适当条件下，不饱和脂肪酸的不饱和键能与碘、溴或氯起加成反应。脂肪分子中如含有不饱和脂酰基，即能吸收碘。100g脂肪所吸收碘的克数称为碘价。碘价的高低表示脂肪不饱和程度的大小。由于碘与脂肪的加成作用很慢，故于Hanus试剂中加入适量溴，使产生溴化碘，再与脂肪作用。过量的溴化碘与脂肪作用后，测定溴化碘剩余量即可求得脂肪之碘价，本法的反应如下：二、实验用品（一）器材（1）碘价滴定瓶（250~300ml），或用具塞锥形瓶代替。（2）量筒...
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2016
7.11

蔬菜中膳食纤维的药学价值和危害

蔬菜中膳食纤维的药学价值和危害定仪：膳食纤维是指不能被人体消化道酵素分解的多糖类及木植素。英国国家顾问委员会建议膳食纤维摄入量为人均25-30g/天；美国FDA推荐的总膳食纤维摄入量为人均每日20-35g（成人）；澳大利亚有关机构指出，人均每日摄入膳食纤维25g，可明显减少冠心病的发病率和死亡率。中国营养学会2000年提出：我国成年人膳食纤维的适宜摄入量为每天30g左右。但据测算，我国人均每日的实际摄入量仅为14克左右，摄入量严重不足，且摄入量随食品精加工水平的提高呈逐步下降...
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2016
7.7

微量凯氏定氮法测定蛋白质总含量

微量凯氏定氮法测定蛋白质总含量一、实验原理天然有机物（如蛋白质和氨基酸等化合物）的总氮量通常用微量凯氏定氮法（micro-kjeldahlmethod）来测定。当被测的天然含氮化合物与浓硫酸共热时分解出氨，氨与硫酸反应生成硫酸铵，此过程称为消化。由于消化过程进行缓慢，实验中常添加硫酸钾和硫酸铜的混合物来促进，硫酸铜是催化剂，硫酸钾可提高消化液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。消化完成后，在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使碳酸铵分解出氨。用水蒸汽蒸馏法将氨蒸入无机酸溶液中，...
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